1、测定方法有以下几种:1.蒽酮法测定可溶性糖2.苯酚法测定可溶性糖3.3 ,5 –二硝基水杨酸比色法测定还原糖4.斐林试剂比色法测定还原糖斐林试剂比色法测定还原糖步骤一、原理 植物组织中的可溶性糖可分为还原糖(主要是葡萄糖和果糖)和非还原糖(主要是蔗糖)两类。
2、还原糖具有醛基和酮基,在碱性溶液中煮沸,能把斐林试剂中的 Cu 2+ 还原成 Cu + ,使蓝色的斐林试剂脱色,脱色的程度与溶液中含糖量成正比,在 590 nm 波长下比色测定吸光度,查标准曲线,即可计算出所测样品中还原糖的含量。
(资料图片)
3、本方法也可用于测定蔗糖及总糖含量。
4、 二、实验材料、试剂与仪器设备 (一)实验材料 新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。
5、(二)试剂 1. 斐林试剂 A 液: 40 g CuSO 4 · 5H 2 O 溶解于蒸馏水定容至 1000 mL 。
6、 2. 斐林试剂 B 液: 200g 酒石酸钾钠( KNaC 4 H 4 O 6 · 5H 2 O )与 150g NaOH 溶于蒸馏水中,并定容至 1000 mL 。
7、 A 、 B 两液分别贮存,使用前等体积混合。
8、 3. 0.1 %葡萄糖标准液:取 80 ℃下烘至恒重的葡萄糖 0.1000 g ,加蒸馏水溶解,定容至 100 mL 。
9、 4. 0.1mol/LNaOH 。
10、 5. 甲基红指示剂: 0.1 g 甲基红溶于 250 mL 60 %乙醇中。
11、 6. 10 % Pb(Ac) 2 。
12、 7. 饱和 Na 2 SO 4 。
13、(三)仪器设备 分光光度计,分析天平,离心机,水浴锅,具塞刻度试管,刻度吸管,容量瓶,研钵。
14、 三、实验步骤 1 . 标准曲线的制作 取 7 支试管,按表 24 – 4 分别加入各溶液。
15、 将以上各管混合后加塞,于沸水浴中加热 15 min 。
16、取出后自来水冷却, 1500 r/min 离心 15 min 。
17、取上清液,用分光光度计在 590 nm 波长下比色,以蒸馏水作对照,读取吸光度。
18、用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标,对应的糖含量为纵坐标,绘制标准曲线。
19、 2. 样品中还原糖的提取 取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎,称取 3.00 g ,放入研钵中研磨至糊状,用水洗入大试管中。
20、体积为 10 ~ 15 mL 时,加 2 ~ 3 滴甲基红指示剂,如呈红色,可用 0.1 mol/L 的 NaOH 中和至微黄色。
21、若用风干样品,可称取干粉 3.00 g ,先在烧杯中用少量水湿润,然后用水洗入 250 mL 容量瓶中,如显酸性,可用上法中和。
22、 将大试管置于 80 ℃的恒温水浴中保温 30 min ,其间摇动数次,以便将还原糖充分提取出来。
23、对含蛋白质较多的样品,此间可加 10 % Pb(Ac) 2 ,除去蛋白质,至不再产生白色絮状沉淀时,加饱和 Na 2 SO 4 除去多余的铅离子。
24、 30 min 后取出冷却,将提取液全部转入 100 mL 容量瓶中。
25、定容至刻度,摇匀后过滤待测。
26、 3. 样品测定 吸取 6 mL 待测液,加 4 mL 斐林试剂,其他操作与标准曲线相同,在 590 nm 波长下读取吸光度。
27、以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度,在标准曲线上查出糖含量。
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